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簡(jiǎn)述凝膠層析技術(shù)的原理和過(guò)程
點(diǎn)擊次數(shù):479 更新時(shí)間:2024-04-19

凝膠層析(又叫凝膠過(guò)濾或分子篩)凝膠層析是指混和物隨流動(dòng)相流經(jīng)固定相的層析柱時(shí),混合物中各組分按其分子大小不同而被分類的技術(shù)。


簡(jiǎn)述凝膠層析技術(shù)的原理和過(guò)程

1.  原理

凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì),凝膠的每個(gè)顆粒內(nèi)部都具有很多細(xì)微的小孔,如同篩子一樣。

常用凝膠有瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、葡聚糖凝膠等。

葡聚糖凝膠介質(zhì)是由多聚葡聚糖與環(huán)氧綠丙烷交連而成。zui常用的葡聚糖凝膠層析介質(zhì)是Sephadex G系列,不同型號(hào)的凝膠用G表示,G代表交聯(lián)度,從G10到G100?!癎"后面的數(shù)字表示每10g干膠的吸水量,可根據(jù)待分離混和物分子量大小選用不同“G"值的凝膠。

2.  分離過(guò)程:

樣品隨洗脫液的流動(dòng)下移

3.  影響凝膠柱層析的主要因素

(1)層析柱的選擇與裝填層析柱的大小應(yīng)根據(jù)分離樣品量的多少及對(duì)分辨率的要求而定。凝膠柱填裝后用肉眼觀察應(yīng)均勻、無(wú)紋路、無(wú)汽泡。

(2)流動(dòng)相――洗脫液的選擇:是含有一定濃度鹽的緩沖液,目的是為了防止凝膠可能有吸附作用。其選擇主要取決于待分離樣品,一般來(lái)說(shuō)只要能溶解洗脫物質(zhì),并不使其變性的緩沖液都可用于凝膠層析。

(3)加樣量:加樣量的多少應(yīng)根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)而定:一般分級(jí)分離時(shí)加樣量約為凝膠柱床體積的1%-5%,而分組分離時(shí)加樣量約為凝膠柱床體積的10%-25%.

(4)凝膠再生:葡聚糖凝膠再生使用NaOH(0.2M)和NaCl(0.5M)混合液處理。

我司供應(yīng)各種凝膠系列產(chǎn)品
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱
SY2141    葡聚糖凝膠LH-20
SY2142    葡聚糖凝膠LH-60
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SY2563    ConA-瓊脂糖凝膠4B
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SY2650    DEAE 纖維素DE-32
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SY2652    羧甲基纖維素CM-52
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