現(xiàn)在較常用的質粒提取方法有三種:堿裂解法、煮沸法和去污劑裂解法，前兩種方法較為劇烈，適用于較小的質粒（＜15Kb），而去污劑裂解法則比較溫合，一般用于分子量較大的質粒（＞15Kb）。

堿裂解法是一種廣泛使用的制備質粒DNA的方法。其原理為：染色體DNA遠遠大于質粒DNA，染色體DNA為線狀分子，而質粒為共價閉合環(huán)狀分子。當pH 12.0-12.6堿性環(huán)境中，線性的大分子的染色體DNA*變性，而共價閉環(huán)質粒DNA在將PH調至中性后即可以恢復其天然構象，在高鹽濃度存在的條件下，染色體DNA和蛋白質在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質粒DNA仍為可溶狀態(tài)，通過離心可除去大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質，質粒DNA仍在上清中。

質粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進行自主復制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器（主要指線粒體和葉綠體）中和細菌細胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸分子?，F(xiàn)在習慣上用來專指細菌(大腸桿菌）、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體。質粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那/霉素抗性基因等。有些質粒稱為附加體(episome)，這類質粒能夠整合進細菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質粒在宿主細胞體內(nèi)外都可復制。(Vector)(DNA)

目前，已發(fā)現(xiàn)有質粒的細菌有幾百種，已知的絕大多數(shù)的細菌質粒都是共價閉合環(huán)狀DNA分子(簡稱cccDNA)。細菌質粒的相對分子質量一般較小，約為細菌染色體的0.5%～3%。根據(jù)相對分子質量的大小，大致上可以把質粒分成大小兩類：較大一類的相對分子質量是40×106以上，較小一類的相對分子質量是10×106以下(少數(shù)質粒的相對分子質量介于兩者之間)。每個細胞中的質粒數(shù)主要決定于質粒本身的復制特性。按照復制性質，可以把質粒分為兩類：一類是嚴緊型質粒，當細胞染色體復制一次時，質粒也復制一次，每個細胞內(nèi)只有1～2個質粒；另一類是松弛型質粒，當染色體復制停止后仍然能繼續(xù)復制，每一個細胞內(nèi)一般有20個左右質粒。這些質粒的復制是在寄主細胞的松弛控制之下的，每個細胞中含有10-200份拷貝，如果用一定的藥物處理抑制寄主蛋白質的合成還會使質粒拷貝數(shù)增至幾千份。

質粒提取原理

現(xiàn)在較常用的質粒提取方法有三種:堿裂解法、煮沸法和去污劑裂解法，前兩種方法較為劇烈，適用于較小的質粒（＜15Kb），而去污劑裂解法則比較溫合，一般用于分子量較大的質粒（＞15Kb）。

堿裂解法是一種廣泛使用的制備質粒DNA的方法。其原理為：染色體DNA遠遠大于質粒DNA，染色體DNA為線狀分子，而質粒為共價閉合環(huán)狀分子。當pH 12.0-12.6堿性環(huán)境中，線性的大分子的染色體DNA*變性，而共價閉環(huán)質粒DNA在將PH調至中性后即可以恢復其天然構象，在高鹽濃度存在的條件下，染色體DNA和蛋白質在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質粒DNA仍為可溶狀態(tài)，通過離心可除去大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質，質粒DNA仍在上清中。

質粒提取常見問題分析

1、影響質粒提取的因素有哪些？

質粒提取的得率和質量與很多因素有關，如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細菌細胞的裂解、質?？截悢?shù)、質粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附膜的吸附能力、提取操作的熟練程度等等。

2、為什么從革蘭氏陽性菌中提取質粒要在懸浮液中加入溶/菌酶？

革蘭氏陽性菌有一層細胞壁，必須加入溶/菌酶才能使之溶解。

3、如何根據(jù)實驗需要選擇不同級別的產(chǎn)品？

從純度上：各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測序、文庫篩選、連接和轉化，普通純度的質?？梢詽M足要求；而對于轉染實驗，則要求使用高純度質粒提取試劑盒方能滿足要求。

從提取的量上：1-20μg，應選擇小量提取試劑盒；20-40μg，應選擇中量提取試劑盒；大于40μg，應選擇大量提取試劑盒。

從宿主菌上：分為普通細菌質粒提取試劑盒、G+菌質粒提取試劑盒和酵母菌質粒提取試劑盒，根據(jù)情況進行選擇。