遠(yuǎn)慕課堂又來啦！
這一次干貨滿滿喲，
快來看看ELISA在生物藥研發(fā)中的直接法實(shí)驗(yàn)方案吧！

ELISA定量方法的類型和構(gòu)架
采用ELISA技術(shù)進(jìn)行定量的平臺(tái)化方法——一般來說可以分為兩類，即間接法和直接法。

間接法也稱為競爭法，直接法也稱雙抗夾心法。

今天，我們重點(diǎn)為大家介紹直接法。

直接法以定量抗原為例：

首先，以與抗原有強(qiáng)親和力的抗體包被固定在酶標(biāo)板材上，加入抗原標(biāo)準(zhǔn)品/樣品反應(yīng)，再加入與抗原有強(qiáng)親和力的抗體并且偶聯(lián)了辣根過氧化氫酶HRP/堿性磷酸酶AP的酶聯(lián)抗體反應(yīng)，后加入酶對(duì)應(yīng)的底物顯色，中間通過洗滌去除反應(yīng)體系中未結(jié)上的試劑成分。

這樣信號(hào)大小和抗原的濃度成正相關(guān)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行酶標(biāo)板材上固定的成分由抗體，轉(zhuǎn)變?yōu)榭贵w-抗原，后變?yōu)榭贵w-抗原-酶聯(lián)抗體，待測的抗原處于兩個(gè)抗體之間，所以也稱為雙抗夾心法。

雙抗夾心法有一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：待檢測的物質(zhì)（如抗原）必須給包被抗體和酶聯(lián)抗體提供兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，這兩個(gè)位點(diǎn)可以是抗原上兩個(gè)以上相同的結(jié)構(gòu)位點(diǎn)，也可以是不同的結(jié)構(gòu)位點(diǎn)。

一般來說，Elisa的構(gòu)架由標(biāo)準(zhǔn)品，內(nèi)控品，空白對(duì)照，基質(zhì)對(duì)照和待測樣品組成。
 

 標(biāo)準(zhǔn)品 

根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體應(yīng)用方向來源，標(biāo)準(zhǔn)品可以是已知濃度的/國家標(biāo)準(zhǔn)品或者商業(yè)化的已知濃度的蛋白分子，也可以是自制的以其他方式定量（如紫外吸收定量）的純度較高的蛋白分子。標(biāo)準(zhǔn)品一般為7-8個(gè)濃度點(diǎn)，擬合成合適的濃度-信號(hào)劑量曲線作為標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行內(nèi)控品和樣品的定量。

 內(nèi)控品 

其中，內(nèi)控品是能夠長期使用的、獨(dú)立分裝的、特定濃度（高中低）的標(biāo)準(zhǔn)品，是監(jiān)控ELISA實(shí)驗(yàn)在單次實(shí)驗(yàn)中的質(zhì)量和長期的應(yīng)用過程中不同批次標(biāo)準(zhǔn)品的過渡橋接。

 空白對(duì)照 

空白對(duì)照為不含標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，基質(zhì)對(duì)照則為不含樣品的樣品溶液——兩者可能是一樣的成分，也可能是不同的成分，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的具體情況進(jìn)行區(qū)分，目的是確認(rèn)ELISA體系中是否有非特異的交叉反應(yīng)。