緩沖溶液一般是由溶度較大的弱堿（或弱酸）及其共軛酸（或共軛堿）組成，可通過弱酸解離平衡的移動(dòng)達(dá)到消耗掉外來少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿，或?qū)股约酉♂尩淖饔茫谷芤簆H值不發(fā)生明顯的變化，在科研工作、工業(yè)生產(chǎn)以及一切生命過程中，都是非常重要的。本文將對(duì)生化實(shí)驗(yàn)中常用的緩沖溶液及配制方法進(jìn)行簡(jiǎn)單的介紹。

PB和PBS緩沖溶液

        PB和PBS是生化實(shí)驗(yàn)中為常用的緩沖液，0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液（PB）常用于配制固定液、蔗糖等；0.01mol/L的磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）主要用于漂洗組織標(biāo)本、稀釋血清等，其pH應(yīng)在7.25～7.35之間。

1．磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer, PB）

        配制時(shí)，常先配制0.2mol/L的 NaH₂PO₄和0.2mol/L的Na₂HPO₄，兩者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸鹽緩沖液（PB），根據(jù)需要可配制不同濃度的PB（見表1）。

2．磷酸鹽緩沖生理鹽水（Phosphate Buffered Saline, PBS）

        稱取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50mL，加入1000mL的容量瓶中，后加重蒸水至1000mL，充分搖勻即可得到0.01mol/L的PBS。一般情況下，0.2mol/L PB的pH值稍高些，稀釋成0.01mol/L的PBS時(shí)，?？蛇_(dá)到要求的pH值，如果需要調(diào)整，通常通過調(diào)整PB的pH來實(shí)現(xiàn)。

表1. 0.2mol/L磷酸鹽緩沖液（pH5.7～8.0）

Tris緩沖溶液

        Tris緩沖液除被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑外，還被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長(zhǎng)和線蟲核纖層蛋白中間纖維的形成，同時(shí)也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。

1. Tris-HCl緩沖液

        生化實(shí)驗(yàn)中常用的Tris-HCl緩沖液濃度為0.05mol/L，pH=7.6，主要用于配制Tris緩沖生理鹽水（TBS）、DAB顯色液。配制時(shí)，先以少量重蒸水（300～500mL）溶解60.57g Tris，加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH將pH調(diào)至7.6，后加重蒸水至1000mL，得儲(chǔ)備液，于4℃冰箱中保存。用時(shí)取儲(chǔ)備液稀釋10倍即可（見表2）。

表2. 0.05mol/L Tris-HCl緩沖液（pH7.19～9.10）

2. Tris緩沖生理鹽水（Tris Buffered Saline，TBS）

        TBS主要用于漂洗標(biāo)本，常用于免疫酶技術(shù)中。先以重蒸水少許溶解3.5～9g NaCl，再加0.5mol/L Tris-HCl緩沖液 100mL，后加重蒸水至1000mL，充分搖勻使Tris終濃度為0.05mol/L。

3. Tris-TBS (PBS)

       常用濃度為1%和0.3%，1%Tris-TBS主要用于漂洗標(biāo)本，3%Tris-TBS主要用于稀釋血清。先以重蒸水少許溶解8.5～9g NaCl后，加入10mL (1%)或3mL (0.3%) Triton X-100及0.5mol/L Tris緩沖液1000mL(50mL)或（0.2mol/L的PB），后加重蒸水至1000mL，充分搖勻。

二甲胂酸緩沖液

        先稱取二甲胂酸鈉（MW：214）42.8g，加蒸餾水至1000mL，獲得0.2mol/L的二甲胂酸鈉溶液；再取HCl 1.7mL加蒸餾水至1000mL ,配成0.1N，后取0.2mol/L二甲胂酸鈉溶液500mL及0.1N HCl 28mL混合，加蒸餾水至1000mL，即為0.1mol/L的二甲胂酸鈉緩沖液。不同pH值的配制方法見表3。

表3. 0.1mol/L二甲胂酸鈉緩沖液（pH5.0～7.4）

HEPES緩沖溶液

        HEPES是一種非離子兩性緩沖液，其在pH 7.2~7.4 范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里，其大優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值，并對(duì)細(xì)胞無毒性作用。使用終濃度為10~50mmol/L。關(guān)于HEPES 緩沖溶液的配制，根據(jù)用途，有以下幾種方法：

（1）119.15 g HEPES 溶解在400mL蒸餾水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH，然后用蒸餾水定容至500mL，得1 M HEPES, pH = 7.0，于4°C保存；
（2） HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na₂HPO₄·7H₂O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液調(diào)節(jié)pH值，后定容；
（3）將1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na₂HPO₄·2H₂O、0.2g葡聚糖和1g HEPES溶解在90mL的蒸餾水，用0.5M NaOH調(diào)節(jié)至所需pH值，再用蒸餾水定容至100mL即可。

MOPS

        MOPS Buffer，即3-嗎啉丙磺酸緩沖液，屬于生物緩沖劑，可作為二維凝膠電泳中等電聚焦電泳（IEF）的電解質(zhì)系統(tǒng)成分；還可應(yīng)用于Northern雜交，作為RNA的分離和轉(zhuǎn)膜時(shí)的緩沖液。常用的10×MOPS Buffer配制方法如下：

（1）稱量41.8 g MOPS，溶解于約700mL DEPC處理水中；
（2）使用2 N NaOH 調(diào)節(jié)pH值至7.0；
（3）向溶液中加入DEPC處理的1M NaOAC 20mL、0.5M EDTA(pH8.0) 20mL；
（4）定容至1 L，用0.45 μm 濾膜過濾除去雜質(zhì)，室溫避光保存。

        緩沖溶液在科研、醫(yī)學(xué)、工農(nóng)業(yè)中都有及其廣泛的應(yīng)用，研究工作的溶液體系pH值的變化往往會(huì)直接影響到研究工作的成效。在選擇和配制緩沖溶液時(shí)，要(1)選擇合適的緩沖系，確定pH位于緩沖范圍內(nèi)，并且不干擾主反應(yīng)；(2)有較好的緩沖能力，使緩沖體系有較大的緩沖容量；(3)濃度合適：總濃度過低，緩沖容量過小，總濃度過高，滲透壓過大。配制出合適的緩沖溶液，才能夠達(dá)到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/span>